Transfeksi sel mamalia dengan DNA plasmid


Metode transfeksi

Jika pengenalan plasmid DNA asing ke dalam bakteri lazim dikenal sebagai transformasi, maka pengenalan DNA asing pada sel mamalia disebut transfeksi. Ada beberapa metode transfeksi menggunakan bahan kimia yang sering dilakukan. Di antaranya dengan menggunakan kalsium fosfat, sediaan liposom maupun polimer.

Metode kalsium fosfat merupakan metode yang sedeharna dan murah. Kalsium merupakan salah satu ion yang memiliki kanal khusus (Ca2+ channel) pada membran sel. Kalsium fosfat akan berikatan dengan DNA dan membawanya masuk melalui kanal kalsium.

Sediaan liposom seperti halnya lipofectamine (invitrogen), merupakan sediaan yang menyerupai membran lipid bilayer. Liposom ini akam membawa DNA di dalamnya, dan ketika liposom melebur dengan membran sel, DNA akan terbawa masuk ke dalam inti sel. Sediaan liposom ini cukup toksik pada sel.

Sediaan polimer ini diklaim sebagai sediaan yang paling aman untuk transfeksi dengan efisiensi yang tinggi. Meskipun demikian metode mana yang lebih sesuai untuk eksperimen yang dilakukan harus dipertimbangkan juga segi ekonomis dan tujuan transfeksi yang dilakukan.

Plasmid linier atau sirkular?

Untuk dapat diekspresikan secara stabil, maka DNA harus terintegrasi ke dalam genome. Plasmid linier memungkinkan efisiensi transfeksi yang lebih besar. Selain itu, pemotongan plasmid dengan enzim restriksi secara in vitro memungkinkan insersi DNA tanpa merusak gen yang ingin kita ekspresikan. Meskipun demikian, begitu masuk ke dalam sel, DNA yang linier akan lebih mudah terdegradasi.

Plasmid sirkular akan terintegrasi ke dalam genome secara random. Terkadang enzim restriksi endogen memotong pada zona aman, terkadang enzim tersebut justru memotong pada gen target. Kalau sudah begitu, meski DNA plasmid bisa terintegrasi ke dlam genome, maka tidak akan bisa terekspresi. Meski demikian, cara ini lebih mudah dan keberhasilannya juga cukup besar.

Advertisements

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s

%d bloggers like this: